分子印跡聚合物可以被形象地描繪為識別“分子鑰匙”的“人工鎖”。近年來，分子印跡技術得到了蓬勃發展，分子印跡聚合物的形態由最初的塊狀發展到現在的印跡微球，合成環境由原來的有機相發展至現在的水相，印跡分子也從小分子發展為水溶性生物大分子。印跡微球不僅省去了研磨、篩分等步驟，還具有規則的形狀、較大的比表面積，可方便地用作色譜填料［1］。水相中制備分子印跡微球則主要是針對多肽、蛋白質等生物分子的水溶性特征，這樣可以在不影響生物分子活性的條件下制備出具有選擇識別性的印跡聚合物。在水相中制備分子印跡聚合物的最大難點在于水分子會削弱印跡分子與功能單體之間的氫鍵作用，從而影響識別空穴的形成，因此研究在水相中制備并識別多肽類生物分子印跡聚合物，對藥物、環境和生物樣品的分析、純化意義重大［2，3］。
眾所周知，通過懸浮聚合［4，5］、沉淀聚合［6～9］和乳液聚合［10，11］等方法可以方便地制備出聚合物微球。然而，懸浮聚合制備的微球粒徑較大、分布較寬且不易控制，沉淀聚合則多在有機溶劑中進行，唯有乳液聚合可在水相中制備出單分散性好的聚合物微球，因此，乳液聚合可用于水相中分子印跡聚合物微球的制備。
雙甘氨肽(Gly-Gly)是一種二肽類生物分子，可作為緩沖劑用于生物化學研究，在生產藥用針劑細作穩定劑，在生物及醫藥研究中具有重要作用。本研究為保持Gly-Gly分子的生物活性，采用低溫氧化還原引發體系，通過乳液聚合在水相中制備了對Gly-Gly分子具有選擇識別性的分子印跡聚合物微球。
1實驗部分
1.1儀器與試劑
雙甘氨肽(Gly-Gly，生化級)，上海晶純科技有限公司;甲基丙烯酸甲酯(MMA，分析純)，天津科密歐化學試劑廠;丙烯酰胺(AM，分析純)、二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA，化學純)、Span80(化學純)、Tween80(化學純)，國藥集團上?；瘜W試劑公司;過硫酸鉀(KPS，分析純)、亞硫酸氫鈉(NaHSO3)，分析純)，西安試劑廠。FD-1型冷凍干燥箱，北京博醫康技術公司;ZetasizerNano型激光粒度分析儀，英國Malvern公司;H-600型透射電子顯微鏡，日本日立公司;722S分光光度計，上海精密科學儀器有限公司。
1.2 Gly-Gly-MIPMs的制備
將比例為1：3的Span80和Tween80復合乳化劑加入到25mL蒸餾水中，在室溫下預乳化20min。通N2除氧，依次滴加5mLMMA、1mmolGly-Gly和4mmolAM的預聚合溶液、1.5mLEDMA和2mLKPS，攪拌30min后升溫至45℃，加入1mLNaHSO3，反應5h。將反應所得的乳液在－25℃條件下冷凍干燥成粉末，依次用蒸餾水、10%乙酸的甲醇溶液洗滌，再經超聲清洗處理30min，離心并棄去上清液。最后，將得到的MIPMs于60℃真空干燥至恒重備用。空白分子印跡聚合物NMIPMs(不加印跡分子Gly-Gly)的制備方法與MIPMs相同。
1.3 Gly-Gly濃度的測定
雙甘氨肽分子由2分子甘氨酸縮合而成，因此可根據氨基酸與茚三酮的顯色反應，采用分光光度法測定Gly-Gly的標準曲線［12］。一系列Gly-Gly溶液經茚三酮顯色后測定其在570nm處的吸光度，經擬合得到Gly-Gly溶液的標準曲線，其線性相關系數R=0.99937。未知Gly-Gly溶液的濃度則通過測定其顯色后在570nm處的吸光度，然后由標準曲線計算得到該溶液的濃度。
1.4 Gly-Gly-MIPMs靜態吸附性能的測定
分別稱取制備的Gly-Gly-MIPMs和NMIPMs各0.20g置于錐形瓶中，加入20.00mL濃度為4mmol/L的Gly-Gly溶液，在室溫下振蕩吸附8h，然后取少量吸附液于離心管中，以4000r/min轉速離心10min，測定Gly-Gly的濃度。根據式(1)計算出Gly-Gly-MIPMs對Gly-Gly的單位吸附量。
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