羊膜上皮細(xì)胞的接種培養(yǎng)取生長(zhǎng)良好的人羊膜上皮細(xì)胞Wish株（中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所），生理鹽水漂洗兩次，加入025%胰蛋白酶消化后，培養(yǎng)液終止消化，離心，棄去液體，加入10%小牛血清的RPMI-1640雙抗（青霉素1105U/L，鏈霉素100mg/L）培養(yǎng)液稀釋成1107/L細(xì)胞懸液，接種5mL于已固定有纖維蛋白塊的培養(yǎng)瓶中，置入375%CO2恒溫培養(yǎng)箱（SHELL/JB）中培養(yǎng)。
形態(tài)學(xué)觀察倒置顯微鏡觀察采用倒置顯微鏡（Olympus），分別觀察各培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)纖維蛋白塊及人羊膜上皮細(xì)胞在纖維蛋白塊上生長(zhǎng)情況。Giemsa染色倒置顯微鏡觀察接種人羊膜上皮細(xì)胞2d后，吸棄培養(yǎng)液，細(xì)胞用01mol/LPBS漂洗2次，用固定液（甲醇冰醋酸31）固定30min后，棄去固定液，Giemsa工作液染色20min，蒸餾水漂洗后，倒置顯微鏡下觀察并拍照。
掃描電子顯微鏡觀察接種羊膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)2d后，吸棄培養(yǎng)液，01mol/LPBS漂洗細(xì)胞兩次，用01mol/LPBS配制的2%戊二醛固定液固定后，采用掃描電子顯微鏡（KYKYAMRAY1000B）觀察并拍照。
結(jié)果1Giemsa染色觀察纖維蛋白支架呈細(xì)網(wǎng)狀，較透亮，在不同視野纖維蛋白支架上均有人羊膜上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，細(xì)胞多呈圓形。纖維蛋白支架Giemsa染色后變?yōu)殚冱S色，羊膜上皮細(xì)胞染色后呈紫藍(lán)色，細(xì)胞核藍(lán)色，隨細(xì)胞數(shù)目增多，藍(lán)色加深。
掃描電子顯微鏡觀察纖維蛋白支架的形態(tài)纖維蛋白支架呈不規(guī)則的立體空間結(jié)構(gòu)，表面縱橫交錯(cuò)，多層次網(wǎng)絡(luò)狀。羊膜上皮細(xì)胞形態(tài)羊膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)較好，細(xì)胞呈凸起球狀物，絨毛狀。細(xì)胞之間有較長(zhǎng)的偽足等多種形狀的接觸（4）。
討論近年來，由于生物材料具有可塑性強(qiáng)可吸收可降解以及不引發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)等特點(diǎn)，受到研究者廣泛的關(guān)注并不斷應(yīng)用于臨床修補(bǔ)和細(xì)胞培養(yǎng)的載體。王一飛等<1>以血纖維蛋白凝塊及脂肪組織為支架構(gòu)建三維組織模型培養(yǎng)巨噬細(xì)胞和3T3成纖維細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞在支架上生長(zhǎng)分化良好。
人羊膜上皮細(xì)胞間的細(xì)胞接觸已有的研究用于羊膜腔封閉的生物材料盡管能阻止羊水滲漏，但大多為機(jī)械性封閉作用<2-4>，封閉后是否能夠促進(jìn)羊膜破口修復(fù)是更需要關(guān)注的問題，破口處的封閉物可能退縮或被降解，若其邊緣的羊膜上皮細(xì)胞能夠生長(zhǎng)并修復(fù)胎膜破口，胎膜的完整性和組織學(xué)結(jié)構(gòu)得以恢復(fù)，則可以達(dá)到最佳的治療效果。
人羊膜上皮細(xì)胞間的細(xì)胞接觸體外構(gòu)建的纖維蛋白支架塊由纖維蛋白原纖維結(jié)合素因子復(fù)合物%因子凝血酶抑肽酶和鈣組成，是一種天然高分子材料，來源于哺乳動(dòng)物（牛）和人血清，它是模仿血凝級(jí)聯(lián)反應(yīng)的最后階段，形成穩(wěn)定的血凝塊，可對(duì)抗空氣或液體的通過；具有生物相容性，可吸收性無(wú)毒性等特點(diǎn)，特別是能快速形成，維持時(shí)間長(zhǎng)，纖維蛋白溶解緩慢，我們研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶中的纖維蛋白塊置入CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，持續(xù)20d未見明顯降解，提供了羊膜上皮細(xì)胞在纖維蛋白支架生長(zhǎng)增殖的充足時(shí)間。
[1][2]下一頁(yè)>>
相關(guān)信息 
推薦企業(yè) 推薦企業(yè)
推薦企業(yè)
源經(jīng)編.gif)
您所在的位置：
