2.9百合中總生物堿的含量測(cè)定取江蘇宜興、甘肅蘭州、浙江湖州和湖南龍山產(chǎn)地的百合飲片，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液3.0mL，置于分液漏斗中，按“2.4”項(xiàng)下方法操作，于414nm處依法測(cè)定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算百合總生物堿的含量，結(jié)果見表2。
3·討論
經(jīng)查閱，2010版《中國(guó)藥典》中僅記載有百合藥材的鑒定方法，并未有其相關(guān)的定量指標(biāo)。生物堿類成分是百合主要的抗腫瘤活性成分。然而，除了秋水仙堿外，百合中與秋水仙堿具有相同結(jié)構(gòu)的卓酚酮類生物堿也具有較好的抗癌活性，且秋水仙堿在藥材中的含量低，若僅以秋水仙堿作為含量測(cè)定指標(biāo)，并不能代表整個(gè)藥材的抗腫瘤活性成分。因此，選擇總生物堿為檢測(cè)指標(biāo)，以秋水仙堿為對(duì)照品，采用酸性染料比色法測(cè)定百合中總生物堿的含量，從而建立百合含量測(cè)定指標(biāo)。筆者運(yùn)用此方法，對(duì)江蘇宜興、甘肅蘭州、浙江湖州和湖南龍山產(chǎn)地百合中的總生物堿分別進(jìn)行了含量測(cè)定，由測(cè)定結(jié)果得知，百合總生物堿的含量在0.438%～0.749%，其中以甘肅蘭州產(chǎn)地居高，江蘇宜興最低。
酸性染料比色法是一種測(cè)定總生物堿含量的較好方法，靈敏度高，專屬性較好。酸性染料比色法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的要求較為嚴(yán)格，選擇合適的測(cè)定條件是關(guān)鍵。在總生物堿含量測(cè)定時(shí)，緩沖溶液pH、酸性染料用量和氯仿用量是顯著的影響因素。本試驗(yàn)分別考察了pH=3.2、3.4、3.6、3.8、4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液、用量為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL的酸性染料和用量為3.0、5.0、10.0、15.0、20.0mL的氯仿溶液對(duì)生物堿與酸性染料結(jié)合程度及其絡(luò)合物被萃取程度的影響。依據(jù)測(cè)定吸光度值的大小，最終確定緩沖溶液pH3.6、酸性染料用量5.0mL、氯仿用量10.0mL為酸性染料比色法測(cè)定百合總生物堿的最佳萃取顯色條件，并且在實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)禁在氯仿萃取液中混入水分，否則會(huì)使溶液變渾濁，影響比色結(jié)果。故在測(cè)定吸光度前，必須用脫水劑（如無水硫酸鈉）除去萃取溶劑中的水分。
此外，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)溴甲酚綠顯色劑放置一段時(shí)間后會(huì)不穩(wěn)定，因此顯色劑應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。從而可以保證測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定。 在實(shí)驗(yàn)過程中，以總生物堿的含量高低為指標(biāo)，對(duì)百合中總生物堿的提取方法（包括乙醇回流、氯仿超聲、酸水超聲、酸水回流）進(jìn)行了考察。經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，采用酸水回流提取的方法，可使百合中的總生物堿成分提取完全，從而有利于百合充分發(fā)揮抗腫瘤的藥效。
4·參考文獻(xiàn)
[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.一部.2010：123
[2]李天真.百合功能性因子的研究進(jìn)展.食品科技，2007（7）：248第一作者：杜萌（1986-），碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴帍?fù)方及新藥研究。
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