1.1原理福林試劑在堿性條件下可被酚類化合物還原呈藍色反應(鉬藍和鎢藍的混合物)。由于蛋白質分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等),它使蛋白質及其水解產物呈上述反應,利用這個原理可以測定蛋白酶活力的強弱。以酪蛋白為作用底物,在一定pH值和溫度下,同酶液反應,經一段時間后加入三氯乙酸,終止酶的反應,并使殘余的酪蛋白質沉淀,同水解產物分開。經過濾后取過濾液(含蛋白質水解產物的三氯乙酸溶液),用Na2C03堿化,再加入福林試劑使之發色。藍色反應的強弱與過濾波中蛋白水解產物的量成正比例,而水解產物的量又同酶活力成正比。因此,根據藍色反應的強弱可以計算出蛋白酶的活力。1.2操作方法1.2.1 試劑1.2.1.l福林試劑于2000ml磨口回流裝置內加入鎢酸鈉(Na2WO4·2H2O)100g,鉬酸鈉(NaMoO4·2H2O)25g。水700ml,85%的磷酸50ml,濃鹽酸100ml,文火回流10h,加入硫酸鋰(Li2SO4)150g,蒸餾水50ml,混勻取去冷凝器,加入幾滴液體溴,再蒸沸15min,以驅逐殘溴及除去顏色,溶液應呈黃色。若溶液有綠色,需再加數滴液溴,再蒸沸除去,冷卻后定容至1000ml,過濾,置于棕色瓶中保存,此溶液使用時加2倍蒸餾水稀釋。1.2.1.2 0.4mol/l的TCA溶液稱取三氯乙酸65.4g,加水定容至1000ml。1.2.1.3 0.8mol/l的碳酸鈉溶液稱取無水碳酸鈉84.8g,加水溶解,定容至1000ml。1.2.1.4 pH值為3.6的醋酸緩沖液稱取NaAc·3H20 16g與268ml濃度為6mol/l的醋酸溶液混合,稀釋定容至1000ml。1.2.1.5 2%酪蛋白溶液稱取干酪索20g,加入0.lmol/l的氫氧化鈉20ml,在水浴中加熱溶解,然后用pH值為3.6的醋酸緩沖液定容至10
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