表面活性劑的判別試驗對陰、陽離子表面活性劑顯色比較明顯，對非離子、兩性表面活性劑可能難以確證，可用這兩種表面活性劑的確證試驗來進(jìn)行確證。
(1)聚氧乙烯型表面活性劑的確證試驗一一硫氰酸鈷試驗。
①基本原理：鈷離子(粉紅色)在飽和醇溶液中可與硫氰酸根生成藍(lán)色的硫氰酸鈷絡(luò)合物：CO2++4SCN-==Co(SCN)42-，這個絡(luò)合物不十分穩(wěn)定，當(dāng)溶液稀釋，其反應(yīng)即逆向進(jìn)行。由于非離子表面活性劑膠束的存在，使膠束內(nèi)形成醇的局部飽和，硫氰酸鈷可保持穩(wěn)定，溶
液呈現(xiàn)藍(lán)色；若無聚氧乙烯非離子表面活性劑存在，則呈現(xiàn)鈷離子的粉紅色。
②硫氰酸鈷試劑的配制：將174g硫氰酸銨和28g硝酸鉆溶解于1L蒸餾水中。
③試驗方法：取1％的試樣水溶液5mL，加入5mL硫氰酸鈷試劑溶液中，搖動使充分混合，放置2h后觀察溶液顏色變化。
④結(jié)果判別：
a若呈現(xiàn)藍(lán)色，則表示有聚氧乙烯型非離子表面活性劑存在；若呈現(xiàn)紅紫色乃至紫色則無聚氧乙烯型非離子表面活性劑存在。
b．若有藍(lán)色沉淀和紅紫色生成，表示有陽離子表面活性劑存在。
(2)兩性表面活性劑的確證試驗一一酸性橙Ⅱ試驗。
①測試原理：酸性橙Ⅱ與兩性表面活性劑及陽離子表面活性劑生成1：1的配合物，在pH值為1—2時兩者均可被氯仿萃取；在pH值為3—5時，只有陽離子表面活性劑的配合物可被萃取。因此可根據(jù)pH值不同時，氯仿萃取液吸光度的差別定性區(qū)分兩性或陽離子表面活性劑。
②試劑：
酸陸橙Ⅱ試劑：將O。1g酸性橙Ⅱ(市售品應(yīng)在乙醇中重結(jié)晶兩次)溶于100mL水中。
pH值為1的緩沖溶液：稱取氯化鉀(KCl。3H20)5．1g，用190mL蒸餾水溶解后加入11mL濃鹽酸(36％--38％)，混合均勻。
pH值為5的緩沖溶液：稱取醋酸鈉9．1g，用200mL蒸餾水溶解后加入冰醋酸(99％)2mL，混合均勻。
氯化鉀溶液：稱取22．3g氯化鉀溶于100mL蒸餾水中。
③測試步驟：
計測定484nm處的吸光度。
按上述操作，在分液漏斗中加入1mL酸性橙Ⅱ溶液、2mLpH值為5的緩沖溶液、5mL同種試樣溶液。邊振蕩邊加入2mL氯化鉀溶液，用上述同樣體積的氯仿萃取4次，并使各萃取液通過一底部緊密裝有0．3g玻璃棉(預(yù)先用氯仿潤濕)的滴定管(φ10mm×200mm)，控
制流速12—15mL／min，將萃取液收集于50mL容量瓶中，加入5mL乙醇，用氯仿沖洗玻璃棉并稀釋至50mL。測定484nm處吸光度。
④結(jié)果判別：比較兩次測得的吸光度值，若兩次測得的吸光度一致，表示試樣為陽離子表面活性劑；若第二次(pH值為5)N得的吸光度接近0，而第一次測得的吸光度較大，則表示該試樣為兩性表面活性劑。
⑤說明：
a．如五分光光度計測定吸光度，也可將兩次萃取樣放人比色管進(jìn)行目視比色。色澤深則吸光度值較大；色澤接近則吸光度值也接近。
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