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引言

含苯環類物質在化學工業中具有廣泛的應用，因此形成的工業廢水數量較多，且苯環類物質對環境有一定毒害作用，對生物甚至有致癌致畸作用，因此，苯環類物質的降解，是研究的熱門課題。生物降解是污染物質降解常用的方法，苯環具有一定的生物降解性，因此，微生物降解含苯環物質也有較多研究。

含苯環物質的降解過程中，苯環的打開是評價降解情況的重要指標。因此，要評價一種微生物對污染物的降解能力，考察其生物酶對苯環的降解速率是關鍵，也就是降解苯環的酶活。現有酶活研究方法中，一般通過考察某個側基發色團的變化來判斷酶活力，但因每種物質的發色團不同，導致這類測試方法不具有很好的普適性。有關直接采用苯環開環法來測定酶活的文獻尚未見報道。

針對現有酶活測試方法的局限性，本文提供一種微生物降解苯環的酶活測試方法，該測試方法具有很好地普適性和直接性，且簡便易行。

1實驗材料與方法

1.1材料

桿菌B-F：從廢水中分離獲得；各種化學試劑：從天津科密歐試劑公司購得。

1.2儀器與設備

空氣浴振蕩儀，生化培養箱，滅菌器，可見光分光光度計（VIS-723型，上海精密科學儀器有限公司），紫外分光光度計（UV2401，日本島津公司）

1.3培養基

微生物生長繁殖所需培養基應包含其生長所需的微量元素和基本的碳源，本實驗中所用培養基為選擇性培養基，依靠對苯二甲酸（TA）提供碳源，并加入酵母浸出粉作為有機氮源，用于馴化微生物，并獲得較大量的菌體，使其具有更好的催化改性能力。具體成分如表1所示。

1.4方法

1.4.1制作含苯環底物（以下簡稱底物）濃度與吸光度之間關系的標準曲線：

配制一系列不同濃度的含苯環物質溶液，并在紫外分光光度計上進行全波長掃描，進而確定不同濃度的含苯環物質溶液的最大吸收波長，然后在其最大吸收波長下測定不同濃度的含苯環物質溶液的吸光度，繪制底物濃度與吸光度之間關系的標準曲線圖，找出底物濃度與吸光度之間線性擬合度達到0.999以上的底物濃度范圍，擬合得到用于計算降解過程中苯環含量變化的線性方程；