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2.2以對(duì)苯二甲酸為唯一碳源，桿菌F4降解對(duì)苯二甲酸的酶活

待測(cè)酶活的菌懸液的催化條件，需要加入3g/L磷酸二氫鉀和7g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液，維持體系穩(wěn)定的pH值=6.8，采用該緩沖溶液配制1g/L的對(duì)苯二甲酸溶液。

將底物溶液滅菌后，加熱到37℃，將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中，混合均勻后，在37℃，200r/min下振蕩反應(yīng)，并開始計(jì)時(shí)，經(jīng)過30min后，取出反應(yīng)液，迅速95℃水浴滅活5min，檢測(cè)底物變化：

將上述反應(yīng)前后的反應(yīng)液稀釋50倍，使之在所述線性方程的濃度范圍之內(nèi)。稀釋后的溶液在240nm波長(zhǎng)下，測(cè)試反應(yīng)前后的吸光度分別為1.607和1.472。根據(jù)線性方程計(jì)算反應(yīng)前后對(duì)苯二甲酸的濃度分別為1.004g/L和0.915g/L；將所得對(duì)苯二甲酸的濃度值代入酶活公式（1）中，酶活U=△C/M/△t×103，其中，M為166.13，△t為30，即得到該菌懸液的酶活為：U=0.018。

2.3補(bǔ)加酵母粉為有機(jī)氮源，桿菌F4降解對(duì)苯二甲酸的酶活

在催化反應(yīng)液中加入酵母粉作有機(jī)氮源可有效催進(jìn)微生物對(duì)碳源的消耗速率，從而提高酶活。為了確定酶活的提高程度，向反應(yīng)液中加入1g/L的酵母浸出粉，同時(shí)加入3g/L磷酸二氫鉀和7g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液，維持體系穩(wěn)定的pH值=6.8，最后加入對(duì)苯二甲酸，配成1g/L的溶液。

將底物溶液滅菌后加熱到37℃，將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中，混合均勻后，在37℃，200r/min振蕩反應(yīng)，并開始計(jì)時(shí)。經(jīng)過30min后，取出反應(yīng)液，迅速95℃水浴滅活5min，檢測(cè)底物變化。

將上述反應(yīng)前后的反應(yīng)液稀釋50倍，使之在線性方程的濃度范圍之內(nèi)。稀釋后的溶液在240nm波長(zhǎng)下測(cè)試反應(yīng)前后吸光度分別為1.607和1.341。根據(jù)線性方程計(jì)算反應(yīng)前后對(duì)苯二甲酸濃度分別為1.004g/L和0.829g/L。

代入公式（1），酶活U=△C/M/△t×103，（其中M為166.13，△t為30）得到菌懸液酶活為：U=0.035。與2.2中結(jié)果比較發(fā)現(xiàn)，加入酵母粉可將菌懸液的酶活提高將近1倍。

2.4以原兒茶酸為唯一碳源，細(xì)菌TJ降解原兒茶酸的酶活

待測(cè)酶活的菌懸液的催化條件需要加入4g/L磷酸二氫鉀和6g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液，維持體系穩(wěn)定的pH值為7左右，因此，采用緩沖溶液配制2g/L的原兒茶酸溶液。

將底物溶液滅菌后加熱到37℃，將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中，混合均勻后，在37℃，200r/min振蕩反應(yīng)，并開始計(jì)時(shí)。經(jīng)過30min后，取出反應(yīng)液，迅速95℃水浴滅活5min，檢測(cè)底物變化。