將上述反應前后的反應液稀釋100倍,使之在線性方程的濃度范圍之內。稀釋后的溶液在250nm波長下測試反應前后吸光度分別為1.592和1.491。根據線性方程計算反應前后對苯二甲酸濃度分別為2.000g/L和1.867g/L。
代入公式(1),酶活U=△C/M/△t×103,(其中M為154.12,△t為30)得到菌懸液酶活為:U=0.029。
2.5補加酵母粉為有機氮源,細菌TJ降解原兒茶酸的酶活
在催化反應液中加入酵母粉作有機氮源可有效催進微生物對碳源的消耗速率,從而提高酶酶活。為了確定酶活的提高程度,向反應液中加入3g/L的酵母浸出粉,同時加入4g/L磷酸二氫鉀和6g/L的磷酸氫二鈉作緩沖溶液,維持體系穩定的pH值為7左右,最后加入原兒茶酸配成2g/L的溶液。
將底物溶液滅菌后加熱到37℃,將離心后的菌體懸浮在滅菌后的溶液中,混合均勻后,在37℃,200r/min振蕩反應,并開始計時。經過30min后,取出反應液,迅速95℃水浴滅活5min,檢測底物變化。
將上述反應前后的反應液稀釋100倍,使之在線性方程的濃度范圍之內。稀釋后的溶液在250nm波長下測試反應前后吸光度分別為1.592和1.388。根據線性方程計算反應前后對苯二甲酸濃度分別為2.000g/L和1.731g/L。
代入公式(1),酶活U=△C/M/△t×103,其中M為154.12,△t為30)得到菌懸液酶活為:U=0.058。與2.4中結果比較發現,加入酵母粉可將菌懸液的酶活提高1倍多。
3結論
本測試方法采用菌懸液為催化介質,以含苯環物質為底物,通過催化降解過程中苯環吸光度的變化,繪制出相對應的標準曲線,經過特定公式的計算,即可得出相應的酶活數據。與現有技術相比,本發明測試方法對于含苯環的物質降解過程中酶活的檢測具有很好的普適性,適用于多數含苯環化合物的降解過程中酶活的直接測定,且測試過程簡單,不需要貴重儀器設備,非常適于實際測試使用。
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