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棉團(tuán)鐵線蓮(Clematishexapetala)別名山蓼、棉花團(tuán)、山辣椒秧,為毛茛科鐵線蓮屬多年生草質(zhì)藤本植物,主產(chǎn)于我國黑龍江、吉林、遼寧、河北、山西、陜西、甘肅東部和山東等地。
中國藥典
2005年版將其根及根莖作為威靈仙的正品藥材應(yīng)用,主要用于治療風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)不利等癥。研究表明,鐵線蓮屬植物中含有多種類型的化學(xué)成分,其中主要有效成分為三萜皂苷類,其皂苷元主要為齊墩果酸。目前,對棉團(tuán)鐵線蓮根的化學(xué)成分研究已有報道,但至今尚未見對其莖葉中化學(xué)成分的研究報道。為此,筆者采用HPLC法對棉團(tuán)鐵線蓮的根及莖葉中齊墩果酸的含量進(jìn)行測定,并對測定方法進(jìn)行研究,以期為進(jìn)一步開發(fā)棉團(tuán)鐵線蓮藥用資源提供理論依據(jù)。

1
材料與方法

1.1
材料

1.1.1
研究對象。棉團(tuán)鐵線蓮2009年9月采自吉林通化市,經(jīng)通化師范學(xué)院于俊林教授分類鑒定。

1.1.2
主要試劑。齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品(批號:110709-200304),由中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇為市售色譜純或分析純;其他試劑均為市售分析純;超純水。

1.1.3
主要儀器。Agilent1100型高效液相色譜儀(包括1100四元泵、柱溫箱、二級管陣列檢測器和Agilent化學(xué)工作站),由美國Agilent公司生產(chǎn);CP225D電子天平,由sartoris公司生產(chǎn)。

1.2
方法

1.2.1
色譜條件。色譜柱為YW-C18柱(4.6mm
150
0mm,5
m);流動相為甲醇-水(V
V=90
10);檢測波長為220nm;進(jìn)樣量為10
;l流速為1.0ml/min;柱溫為25
。

1.2.2
供試品溶液的制備。將棉團(tuán)鐵線蓮采后洗凈,陰干,將其根、莖葉分別粉碎過60目篩,備。精密稱取棉團(tuán)鐵線蓮根、莖葉粉末各5.0g,分別置于具塞容量瓶中,加入30ml乙醚超聲處理15min,過濾。在藥渣中加入30ml水飽和正丁醇,超聲提取15min,過濾,重復(fù)2次,合并濾液。分別將濾液置于分液漏斗中,加入2倍量蒸餾水,搖勻,靜置分層(取上層),回收濃縮正丁醇層。將正丁醇濃縮物分別加水稀釋至50m,l再加入鹽酸,使?jié)舛葹?0%,加熱保持微沸30min(保持水分)。酸水解液用等倍量乙酸乙酯萃取3次,回收乙酸乙酯,殘渣用甲醇溶解,定容至5m,l即得供試品溶液。

1.2.3
方法學(xué)考察。

1.2.3.1
線性關(guān)系考察。精密稱取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品20.5200mg,用甲醇溶解并定容至100ml。分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液1
0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于10ml的容量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻,分別進(jìn)樣。以峰面積為縱坐標(biāo)(y),標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(x)計算回歸方程,考察線性關(guān)系。