1850年，Runge在紙上分離鹽溶液。1869年，Goppalsroeder在長(zhǎng)條紙上分析染料和動(dòng)植物色素，色譜法開(kāi)始了它的雛形。經(jīng)過(guò)100多年的發(fā)展，直到氣相色譜法的確立，應(yīng)該是現(xiàn)代色譜法的里程碑，但對(duì)于分析工作者而言，氣相色譜法遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到分析的要求，自然界一多半的化合物無(wú)法達(dá)到氣相色譜法所要求的易氣化、熱穩(wěn)定等特點(diǎn)，直到高效液相色譜法的出現(xiàn)，20世紀(jì)60年代，高效液相色譜法被進(jìn)一步完善，成為分析化學(xué)又一個(gè)里程碑，特別是二級(jí)管陣列檢測(cè)器的應(yīng)用，使我們可以得到每個(gè)組分的HPLC-UV三維譜，80年代末，又一種定性更好的液相色譜檢測(cè)器出現(xiàn)了，那就是質(zhì)譜，它的出現(xiàn)使分析工作者更加準(zhǔn)確的定性定量化合物，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的初期，在連接技術(shù)上一直出現(xiàn)一些技術(shù)障礙，因?yàn)榻?jīng)典的氣質(zhì)電離方式不適于極性大、揮發(fā)性小、易熱分解及分子量大的化合物，直到大氣壓離子化(API)接口技術(shù)的出現(xiàn)，它包括了電噴霧電離技術(shù)(ESI)和大氣壓化學(xué)電離技術(shù)(APCI)，這兩個(gè)接口技術(shù)是如今最溫和的電離技術(shù)，其區(qū)別在于在大氣壓下產(chǎn)生氣相離子的方式不同，該技術(shù)更好更有效的把液相色譜與質(zhì)譜有效的結(jié)合起來(lái)，近年來(lái)HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)得到迅猛的發(fā)展，已經(jīng)逐漸代替氣相色譜成為未來(lái)最主要的分析手段。
1HPLC-MS聯(lián)用系統(tǒng)的工作原理
1.1HPLC-MS聯(lián)用儀液相色譜部分的原理
HPLC-MS聯(lián)用儀分為液相色譜與質(zhì)譜兩個(gè)獨(dú)立的部分，對(duì)于液相色譜系統(tǒng)，色譜柱一般為反相ODS柱，長(zhǎng)度為10mm~50mm的短色譜柱，為了獲得穩(wěn)定、準(zhǔn)確的流動(dòng)相因而需要的流速較低，在較小的流速下，離子化過(guò)程的效率增加。而為了縮短檢驗(yàn)時(shí)間，我們常常使用比較大的流速，這樣就需要內(nèi)徑比較小的色譜柱來(lái)提升組分的分離效率，同時(shí)需要?jiǎng)恿Ρ媚軌蛱峁┖艽蟮牧鲃?dòng)壓力。離子化部分效能的降低可以用改善噴霧過(guò)程和增加帶電霧滴的溶劑蒸發(fā)速率予以一定程度的補(bǔ)償。
液相色譜部分流動(dòng)相是特別要考慮的部分，對(duì)于常用的反相色譜來(lái)說(shuō)，一般選擇C18色譜柱，這樣對(duì)于流動(dòng)相的組分來(lái)說(shuō)為了得到更好的保留效果，常以非解離的狀態(tài)存在于流動(dòng)相中，而流動(dòng)相中以離子存在才能更好的利于質(zhì)譜中氣相離子的形成，因此，這就需要我們調(diào)節(jié)各方面的條件使流動(dòng)相即適合于分離又適合于質(zhì)譜中的離子化。在各調(diào)節(jié)條件中重要的是使用緩沖劑來(lái)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH，應(yīng)該注意需用揮發(fā)性的緩沖劑，以獲得更好的離子化效率，對(duì)于HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)，為了得到更好的檢測(cè)效果并提高靈敏度，還可以運(yùn)用多種手段，比如增加流動(dòng)相的流速、柱后衍生化、添加離子對(duì)等方法來(lái)進(jìn)一步提高檢測(cè)效率。
1.2電噴霧電離(ESI)技術(shù)的原理
電噴霧電離技術(shù)是實(shí)際HPLC-MS聯(lián)用中常用的技術(shù)，其原理就是在常壓下，從液相系統(tǒng)流出的流動(dòng)相進(jìn)入一毛細(xì)管中，毛細(xì)管帶很高的電壓，在幾千伏的高壓下，并在鞘液等輔助手段的幫助下產(chǎn)生高度帶電荷的霧狀液滴，液滴由于高電壓高溫的作用下不斷的碎裂成更小的液滴，小液滴質(zhì)量和電荷重新分配，這個(gè)蒸發(fā)和碎裂的過(guò)程不斷的進(jìn)行下去，最后成為離子，沿著電壓的方向進(jìn)入質(zhì)量分析器。
1.3大氣壓化學(xué)電離(APCI)技術(shù)的原理
APCI中樣品溶液是借助于霧化器的作用，噴入高溫蒸發(fā)器，溶劑和溶質(zhì)都成為蒸汽，再經(jīng)過(guò)針形電暈放電電極，通過(guò)高壓放電，氣化的樣品分子經(jīng)化學(xué)離子化生成氣相離子。被分析物質(zhì)的分子電離后所形成的離子，在壓力差和電位差的共同作用下進(jìn)入質(zhì)譜的質(zhì)量分析器。大氣壓化學(xué)電離適合于小分子極性低的化合物。
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