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從圖4和表2可以看出，噴霧干燥得到的絲膠和2種方法提取的絲膠在遠紫外區185～250 nm范圍內無明顯的雙負峰，因此絲膠蛋白質二級結構沒有a螺旋構象，這與表2分析的結果一致，a螺旋所占的摩爾百分比為零。噴霧干燥得到的絲膠和2種方法提取的絲膠在198 nm左右都出現強的負吸收峰，這主要是無規卷曲結構的特征吸收L1，因此絲膠二級結構以無規卷曲構象為主，所占的摩爾百分比為56左右(見表2)。表2結果表明，與噴霧干燥得到的絲膠相比較，2種方法提取的絲膠對蛋白二級結構分子構象的影響主要在于使不同比例的J3折疊結構轉化為B轉角。這種構象的變化可能與溶解度下降有關，對蛋白質其他功能性質的影響有待進一步研究。2．3．2紅外光譜分析通過紅外光譜的測定分析2種方法提取的絲膠固體粉末中蛋白質二級結構分子構象的變化，結果如圖5所示。根據表3所示的蛋白二級結構分子構象紅外光譜特征譜帶和蛋白質特征吸收峰的歸屬。可知，3 300 cm-1是酰胺A N～H伸縮振動和O—H伸縮振動特征吸收峰，1 650～1 660 cm-1譜峰是酰胺I C～O伸縮振動，1 530 cm-1譜峰為酰胺IIC—N伸縮振動和N—H面內變形振動，1 230～1 240cm-1譜峰為酰胺III C—N伸縮振動和N～H面內變形振動，600 700 cm-1譜峰為酰胺IV N—H面外變形振動。從圖5看出，噴霧干燥、醇沉和酸析得到的絲膠光譜在3 300cm左右都有明顯的單峰，是蛋白質N—H伸縮振動和O—H伸縮振動特征吸收峰；在以無規卷曲構象特征吸收的酰胺I譜帶1 650～1 660 cm-1處都有強的吸收峰，酰胺III1 235 cm-1附近處都有吸收峰，說明絲膠主要都是以無規卷曲結構為主，這與CD光譜分析的結果相似。在8折疊構象特征吸收的酰胺II 1 515～1 525 cm-1處醇沉和酸析得到的絲膠有明顯的單峰，證實有8折疊的存在，而噴霧干燥得到的絲膠沒有特征吸收，其1 546 cm-1處的特征吸收歸屬于無規卷曲構象特征吸收的酰胺II，這說明噴霧干燥得到的絲膠無規卷曲的構象所占的摩爾比較高，這與CD光譜分析的結果相符，說明噴霧干燥得到的絲膠分子構象比較柔軟，因此這可能是其溶解度相對比較高的原因。與噴霧干燥得到的絲膠粗蛋白相比，醇沉和酸析得到的絲膠在2 950～2 850 cm-1處的2個吸收峰和1 400～1 450 cm-1處的2個吸收峰有細微的差異，這可能與經過酸處理和醇處理后蛋白的微細結構的變化有關，如cD光譜分析的結果所示酸處理和醇處理使絲膠蛋白二級結構分子構象中8轉角構象的比例增加。引起這種構象變化原因有待于進一步研究。3結論(1)與酸析法相比，低溫乙醇沉淀法提取率較高，易去除乙醇，產品的灰分低，可有效地去除蠶腥味，而且所需設備簡單，成本低，因此低溫乙醇沉淀法是一種從絲綢生產廢水中提取絲膠的新方法。(2)由于低溫乙醇沉淀法提取的絲膠溶解度有所下降，因此通過CD和IR分析低溫乙醇沉淀法提取的絲膠蛋白二級結構分子構象的變化，結果表明：低溫乙醇沉淀法提取的絲膠蛋白二級結構主要是以無規卷曲的構象為主，因此低溫乙醇沉淀法提取的絲膠分子具有一定的柔性，有較好的水溶性。此外，醇處理對構象的影響主要是使口轉角構象的比例增加，這種構象的變化可能與溶解度下降有關。