試驗成立條件﹕轉印在標準布上試驗菌數達到 1﹒0×106 個以上,增殖值(±0﹒5 以內)F=Mc- Md﹒Md 為剛轉印標準布上的生菌數對數值﹔Mc 為在試驗布上培養 1-4h 后生菌數的對數值﹒
2 ATP(生物發光法)測定細菌數
紡織品上細菌含量測定已沿用 100 多年,采用將試樣上沖洗菌液,在瓊脂上培養?(37±1)℃,(24 ̄48)h后,再測定數量,操作繁雜且費時,精度不高﹔而用 ATP(生物發光法)測定,省時、省力,在技術上是一大進步﹒
利用熒光蟲的熒光素 進行高靈敏度 ATP 測定的原理早在 1950 年已發現﹒近年來用基因重組技術完成了無性繁殖的微生物生產蟲熒光素 ,解決了蟲熒光素 性能穩定性,而基因改性解決了“ 耐熱性”、“ 耐表面活性劑”等問題﹔去除樣本中游離 ATP,從膜過濾改為 分解技術,解決了游離 ATP 問題﹔采用低噪音、感度達 1013M、性能穩定的光電倍增管光量測定儀元件,才使它成為許多領域中一項樂意采用的新技術﹒
日本纖維制品新功能評估協議會(JAEET)已將ATP 測定法作為日本紡織品的抗菌性試驗法抗菌效果(JIS L 1092﹕2002)中增加了一個新的細菌數測定方法,同時也向 ISO 推薦采用﹒
ATP(adenosine triphosphate,三磷酸腺?。┦巧矬w內一種貯藏能源的化學物質,肌肉運動能源提供者,也是生物體產生各種物質的 反應能源﹒因此,有生命活動的地方一定有 ATP 存在﹔反之,存在 ATP 表示有生物存在的可能性﹒細菌細胞中也含有固定的 ATP量,同一種細菌處于對數繁殖期和穩定期其 ATP 含量不同﹒細菌一旦死亡,ATP 會被細胞內的分解 立刻分解殆盡﹒由此可測得樣本中 ATP 濃度用它再除以各菌種不同狀態下每一個細菌的 ATP 數量就可求得樣本中的活菌數﹒利用此原理可以方便測定制備試驗菌液以及培養后的活菌數﹒
ATP 生物化學發光測定操作概要﹕(1)在 ATP 試驗菌液(或接種菌液)以及沖洗的菌液中添加 Apyrase ?。ㄏ佟∪姿犭p磷酸?。┡c腺 胱氨 ,利用 分解將菌體外的游離 ATP 去除﹔(2)在去除游離 ATP 菌液中加入 ATP 萃取劑進行萃取﹔(3)萃取后,加入由蟲熒光素和 D- 蟲熒光素組成的發光試劑,然后用光電倍增管測定由 ATP 和發光試劑反應發出的熒光光量,其反應式如下﹕

由發光量可求得 ATP 濃度(mol/L),再用 ATP 濃度除以如表 1 所示不同菌種在不同狀態下每一個細菌的 ATP 量,即為樣本中活菌濃度(個/mL)﹒
表 1 各菌種每一細胞 ATP 量

相關信息 







推薦企業
推薦企業
推薦企業